Automatisiertes Einzelzell-Sekretionsscreening & -Isolierung von Plasma B-Zellen
Beschleunigen Sie Ihre Antikörperentwicklung: Parallele Analyse und Isolierung tausender Plasma B-Zellen innerhalb eines Tages
Einer der kritischsten und zeitaufwändigsten Schritte in der Antikörperentwicklung besteht in der Identifizierung und Auswahl der optimalen Klone, die hohe Mengen des gewünschten Antikörpers produzieren.
Unsere neue Methode für die Analyse und Isolierung einzelner B-Zellen nutzt den CellCelector™ in Kombination mit der einzigartigen Nanowelltechnologie und kombiniert selektives Zellscreening und -imaging mit sensitiven Einzelzellassays sowie der Isolierung von Einzelzellen in einer einzigen Plattform.
Die Einzelzellanalyse erlaubt insbesondere die Identifizierung seltener Antikörper, welche mit konventionellen Screeningmethoden nur schwer erfasst werden können. Anstelle einer wochenlangen Kultivierung, um eine Mindestzahl an Zellen für die Assays zu erhalten, können mit dieser Methode einzelne Zellen sofort in unterschiedlichen Assays untersucht werden.
CellCelector B-Zellscreening und -isolierung im Detail
Schritt 1: Einfache Zellaussaat
Die Einzelzellsuspension wird manuell in die Wells des Nanowellarrays gegeben. Jedes Well des Arrays besitzt am Boden ein zusätzliches Muster aus Nanowells. Abhängig vom Plattentyp und der Größe der einzelnen Nanowells ergeben sich zwischen 60.000 und 200.000 Nanowells pro Well. Nach Zugabe der Zelllösung verteilen sich die einzelnen Zellen entsprechend der Poissonverteilung zufällig in den einzelnen Nanowells.
H 100 Array: hexagonale 100 µm Nanowells eingesät mit B-Zellen und antigen-spezifisch beschichteten Beads
Schritt 2: Einzelzell-Screening
Die eingesäten Wells werden im ALS CellCelector™ im Hellfeld gescannt. Die Software identifiziert die Nanowells, die mit Einzelzellen besetzt sind, automatisch.
Schritt 3: Durchführung der Sekretionsassays
Die spezifischen Sekretionsassays werden in den Nanowells an den einzelnen Zellen durchgeführt und erlauben somit eine schnelle Identifizierung der interessierenden Zellen.
Das B-Zellscreening auf dem CellCelector™ unterstützt verschiedene zelluläre Assays, u.a.
Bead-basierte antigen-spezifische Assays
Die Plasma B-Zellen werden zusammen mit antigen-spezifisch beschichteten Beads ausgesät.
Antigenspezifische Assays mit beschichtetem Plattenboden
Die Oberfläche des Nanowellarrays wird mit Antigen beschichtet und vor der Aussaat der Plasma B-Zelllösung mit BSA blockiert.
Antigen-exprimierende Reporterzellassays
Die Plasma B-Zellen werden zusammen mit antigenexprimierenden Reporterzellen ausgesät.
Weitere mögliche Assays:
- Rezeptor/Ligand blocking Assay
- Zelloberflächenmarker Assay
- Multiplex Sekretionsassay
- Funktionale Assays (z.B. GFP-exprimierende Zellen)
Schritt 4: Zelltransfer
Nach der Identifizierung der gewünschten Zellen (Treffer) überführt der CellCelector™ die Zellen in die entsprechenden Zielgefäße für nachfolgende Analysen und Prozessierungen.
Aufgrund des sehr sanften Pickverfahrens durch mechanisches Aufsaugen, ermöglicht der ALS CellCelector™ sehr hohe Lebensfähigkeitsraten der entnommenen B-Zellen.
Schritt 5: Dokumentation
Der gesamte Prozess beginnend mit dem Einzelzellscreening bis zum Transfer der gewünschten Treffer wird entsprechend den GLP und GMP Vorschriften vollständig dokumentiert. Qualitativ hochwertige Mikroskopbilder jedes einzelnen Pickprozesses erlauben eine spätere Überprüfung. Alle numerischen und Bilddaten (z.B. morphologische und spektrale Werte) sowie Ausgangs- und Zielpositionen jeder Zelle werden in der Datenbank gespeichert und können einfach und schnell in das kundeneigene LIMS System exporiert werden.
Vorteile des B-Zellscreenings und -transfer mit dem CellCelector™
Robustheit
- Kein Fusionsschritt erforderlich
- Kein Verlust an B-Zellen
- Keine Kreuzkontamination zwischen den Erntevorgängen
Sensitivität
- Extrem sanfter Zelltransfer als Garantie für vitale und gesunde B-Zellen für nachfolgende Applikationen
Flexibilität
- Durchführung projektspezifischer Sektretionsassays auf der CellCelector
- Umfassende Charakterisierung der Zielobjekte: Affinität, Spezifität und Funktionalität
Automation
- Vollständige Automation des kompletten Prozesses ab der Zellaussaat bis zum Export der Zielzellen inklusive Dokumentation
Genauigkeit
- Eindeutige Identifizierung der Einzelzellen im Subnanolitervolumen der Nanowells
- Qualitativ hochwertige Bilder mit bis zu 40x Vergrößerung
Durchsatz
- Paralleles Screening von tausenden Einzel B-Zellen mithilfe der CellCelector
Effizienz
- Verkürzung des Screeningprozesses von mehreren Monaten auf einen Tag
- Deutlich erhöhte Erfolgsrate für die Entdeckung seltener Antikörper
- Beträchtliche Zeit- und Kostenersparnis; günstige Verbrauchsmaterialien
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