CTC Isolierung & Analyse
Entschlüsselung der CTC-Heterogenität auf Einzelzellniveau
Zirkulierende Tumorzellen (CTCs) sind Zellen, die von einem Tumor freigesetzt wurden und in den Blutkreislauf gelangt sind. Nach Anpassung und Besiedlung der Mikroumgebung einer Sekundärstelle bilden sie Metastasen, die für über 90 % der tumorbedingten Todesfälle verantwortlich sind. CTCs, die durch eine einfache Blutabnahme gewonnen werden, können als "Flüssigkeitsbiopsie" dienen, um die Tumoreigenschaften in Echtzeit zu überwachen, einschließlich der Heterogenität zwischen und innerhalb des Tumors. Die Isolierung von CTCs und die anschließende Charakterisierung sind jedoch aufgrund der geringen Anzahl von CTC-Zellen zwischen einer Vielzahl von weißen und roten Blutkörperchen technisch anspruchsvoll. Es wurde eine breite Palette von Analysemethoden für den Nachweis, die Anreicherung und die Isolierung von zirkulierenden Tumorzellen entwickelt. Diese nutzen CTC-spezifische Eigenschaften wie z.B. die Expression von Oberflächenmarkern bzw. Größe, Dichte oder Verformbarkeit.
ALS hat eine einzigartige und vollständige Lösung für den Nachweis und die Isolierung von CTCs nach Anreicherungs- und Färbeschritten entwickelt. Die isolierten Zellen können anschließend für die DNA-, RNA- oder Proteomanalyse verwendet werden. Im Mittelpunkt dieser Lösung steht das ALS CellCelector™ System , das speziell entwickelte Verbrauchsmaterialien (z. B. CellCelector Nanowell-Arrays, MagnetPick™ Objektträger ) und validierte Protokolle verwendet.
Arbeitsablauf der Isolierung und Analyse von zirkulierenden Tumorzellen mit dem ALS CellCelector™
Typischer Arbeitsablauf der CTC Isolierung und Analyse unter Verwendung des ALS CellCelector™. * Die Lyse der roten Blutkörperchen (RBC) ist optional und hängt von der verwendeten Anreicherungsmethode ab. ** Verschiedene Anreicherungstechnologien erlauben die in-situ Markierung direkt nach der Anreicherung, in anderen Fällen erfolgt das Färben nach Entnahme der Probe aus dem Anreicherungsgerät.
Vollständige Kompatibilität mit existierenden Anreicherungstechnologien
Wie in zahlreichen Publikationen gezeigt wurde, ist der ALS CellCelector™ mit einer Vielzahl von vorgelagerten Anreicherungstechnologien kombinierbar:
Positive immuno-magnetische Anreicherung (basierend auf EpCAM Oberflächenmarkern und anderen): z.B. CellSearch®, Isoflux™ , MagSweeper™
Negative Verringerung von weißen Blutkörperchen (WBCs) auf der Basis von CD45 Oberflächenmarkern: z.B. Dynabeads™ , RosetteSep™
Markierungsfreie Trennung auf der Basis von Mikrofluidik oder Filtrierung: z.B. Parsortix™ , Clearbridge™ , Vortex™, ScreenCell ™ , RareCells™ , Circulogix™ etc.
ALS hat Arbeitsabläufe und Verbrauchsmaterialien entwickelt, die die Handhabung von bis zu mehreren hunderttausend Blutzellen pro Probe ermöglichen, ohne dass das Probenvolumen reduziert werden muss.
Anreicherungstechnologie | Referenzen |
Positiv immuno-magnetisch | |
CellSearch® (EpCAM) | Neumann et al., 2016 |
Isoflux™ (EpCAM) | Ma et al., 2016; Cabezas-Camarero et al., 2019; Nimir et al., 2019; Ding et al., 2019 |
MagSweeper™ (EpCAM) | Lohr et al., 2014 |
Dynabeads and hand-held magnet (rVAR2) | Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019 |
CD45 negative Verringerung | |
Dynabeads® CD45/Dynal® MPC®-S | Blassl et al., 2016 |
RosetteSep™ Human CD45 | Yao et al., 2014 |
Größenbasierte Trennung | |
Parsortix™ | Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Donato et al., 2019 |
Dichte-Gradienten-Zentrifugation | |
OncoQuick™ | Heidary et al., 2014 |
CTC Anreicherungstechnologien, die vor der Einzelzellisolierung mit dem ALS CellCelector™ verwendet werden und entsprechende Publikationen (die vollständigen Artikelreferenzen finden Sie unter Publikationen).
Isolierung zirkulierender Tumorzellen (CTCs) aus verschiedenen Krebsarten
Die ALS CellCelector™ Technologie ist in der Lage, einzelne Tumorzellen aus flüssigen Biopsien jeder Krebsart zu isolieren. Führende Krebszentren auf der ganzen Welt, die den CellCelector™ verwenden, arbeiten an weiteren Entwicklungen für zahlreiche Krebsarten und verschiedene Anwendungsbereiche. Die vollständigen Artikelreferenzen finden Sie auf der Seite Publikationen.
Krebsart | Referenzen |
Brust | Heidary et al., 2014; Schneck et al., 2015; Neumann et al., 2016; Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Sprouse et al., 2019 |
Prostata | Lohr et al., 2014; Ma et al., 2016; Nimir et al., 2019 |
Dickdarm | Adalsteinsson et al., 2013; Cabezas-Camarero et al., 2019 |
Bauchspeicheldrüse | Kim et al., 2019 |
Eierstock | Blassl et al., 2016 |
Lunge | Yao et al., 2014; Ding et al., 2019 |
Hirn | Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019 |
Melanom | Sprouse et al., 2019 |
Vorteile der CellCelector™ Plattform für die Isolierung zirkulierender Tumorzellen (CTCs)
Zuverlässig
- Sehr geringer Zellverlust (kein Totvolumen).
- Einzelzell-Pickeffizienz bis zu 100 % (abhängig vom Arbeitsablauf).
- Automatisierte Kontrolle des Pickvorgangs (Gepickt/Fehlgeschlagen).
Schnell
- 20 einzelne CTCs gepickt in nur 10 min, machen den CellCelector
- Der Prozess des Auszählens und der Isolierung der CTCs dauert ca. 1 Stunde pro Probe (beginnend mit der angereicherten und markierten Probe).
Einfach in der Anwendung
- Keine aufwändige Probenvorbereitung notwendig.
- Benutzerfreundliche und leistungsstarke Software.
Äußerst vielseitig
- Isolierung einzelner CTCs und Cluster.
- Isolierung fixierter und lebender Zellen.
- Direkte Kompatibilität mit verschiedenen vorgelagerten Anreicherungsmethoden.
- Automatisierte CTC Detektion basierend auf Zellmorphologie, pathologischen Verfärbungen und/oder bis zu 6 Fluoreszenzmarkierungen.
- Automatische, halbautomatische oder manuelle Zellenauswahl für den Pickprozess.
- Picken einzelner Zellen oder Pooling von Zellen.
- Kompatibel mit den meisten Verbrauchsmaterialien: Wellplatten, Petrischalen, Mikroskopobjektträgern, PCR-Platten und Tubes, Nanowell-Arrays, kundenspezifische Consumables etc..
Vollständige Kompatibilität mit diversen Downstream-Analysen und Kultivierungs-Workflows
- Kompatibilität mit einer breiten Palette von molekularen Analysemethoden auf Einzelzellniveau einschließlich NGS, RNAseq, etc..
- Geringe Ansaug- und Abgabevolumina für eine optimale Kompatibilität mit allen Einzelzell-WGA- und qRT-PCR-Kits.
- Temperaturkontrollierte Zielpositionen (4 bis 37 °C) zur Vermeidung von RNA-Degradierung und zur Verbesserung der Überlebenrate lebender Zellen.
- Geringe Scherkräfte und schnelles Picken zur schonenden Behandlung lebender Zellen.
Möchten Sie mehr erfahren?
ZUGEHÖRIGE PRODUKTE
CellCelector™
CellCelector™ Sicherheitsgehäuse
CellCelector™ Glaskapillaren