半固态培养基中杂交瘤和CHO克隆的筛选
用于抗体生产的高表达克隆的筛选与分离
开发用于抗体生产的新细胞系的一个基本步骤是鉴定单细胞来源的具备高产及一致性的靶向蛋白。与传统技术费时费力的步骤相比，使用 CellCelector™ 进行生产力筛选可大幅度提高效率。
高产克隆的筛选与分离
杂交瘤克隆的抗体产生在不同的克隆间有很大的差异。克隆产生并分泌到培养基中的蛋白质可以通过荧光标记的二抗可见。由于半固态培养基的粘度阻止抗体进一步扩散到培养基中，信号将在产生抗体的细胞克隆周围显示为荧光晕。在选择特定的高产克隆中 CellCelector™ 软件比较明场视野下可见的细胞团大小和细胞团周围荧光晕的大小，计算每个克隆的抗体产生率。这允许在多个细胞源板上对细胞克隆进行排序，以获得最佳抗体生成。
杂交瘤克隆（浅蓝色）和荧光标记二抗（绿色带黄色圆圈）检测分泌抗体（深蓝色）示意图（A-C）
荧光标记二抗（D-F）孵育后杂交瘤克隆的显微镜观察效果（明场和荧光的叠加）。
抗体生产的强度与克隆团周围荧光晕的直径相关：产生无抗体的克隆团（A和D），产生中等量抗体的克隆团（B和E）；产生大量抗体的克隆团=高产克隆（C和F）。克隆团大小相似（见明亮视野观察D-F扩大区域）。
产生抗体的CHO细胞团；ALS CellCelector™ 半固体培养基模块捕获前后的QC图像
用半固体培养基模块收集并转移到96孔目标板上培养的CHO细胞团（收获后第1天和第5天）。
利用 CellCelector™ 进行甲基纤维素等半固体培养基单克隆筛选的优势
高分辨率光学与智能成像系统
- 检测大克隆附近的小克隆团或单个细胞，确保目标克隆的单克隆分离。
- 可以分析克隆的结构和形态参数(例如, 球体和形状）可以定义并排除可疑的 (例如拉长）的克隆。
- 用于质量控制的显微图像（捕获前后）和捕获期间的实时图像。
使用一次性挑头
- 使用一次性塑料头，自动更换，避免交叉污染和喷嘴堵塞。
- 无需清洗步骤来清除挑头污染。
- 不同内径选择满足不同大小克隆。
特点
- 从一批检测板中选出排名靠前的优质克隆体：首先扫描所有平板，然后逐板挑选。
- 控制低吸入量和速度，防止同时捕获相邻克隆。
- 捕获过程中相邻克隆移动的自动验证可确保所有目标克隆在抽吸前自动重新居中。
- 在挑克隆前对目标克隆周围区域的自动分析避免了挑到相邻太近的克隆。
- 用户可定义的排序和排名策略，例如，克隆质量、大小或生产率的排名。
相关文献
- Zoldan, K. et al. Automated clonal selection of high-producing hybridoma colonies from methylcellulose-based, semi-solid medium using the cell separation robot CellCelectorTM nature methods application notes (2010)
- Caron A.W. et al. Fluorescent labeling in semi-solid medium for selection of mammalian cells secreting high-levels of recombinant proteins (CHO) BMC Biotechnol. 9: 42 (2009)
- Julien, A. et al. Antigen specific antibody-producing clones selected by isotypes Biosystems International Application Note
- Gilbert, R. Fluorescent labeling in Semi-Solid Medium to Identify High Expressing Clones for Recombinant Protein Production (CHO) CHI's Bioprocessing Summit Presentation, Boston 2011
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