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HSC子细胞分离

HSC子细胞分离或“双细胞分离”

造血干细胞(ihematopic stem cells,HSC)位于造血系统的顶端,负责建立和维持一个功能正常的血液系统。HSC通过自我更新以及产生造血系统的多种血系统来实现这一点。因此,自我更新与分化的平衡对我们血液系统的健康运行具有重要意义。

然而,导致一个或另一个干细胞命运的动力学还不完全清楚。研究命运决定的一种可能性是CFC分析(详见造血干细胞集落)。然而,CFC分析研究的是单个干细胞或祖细胞的集落形成,但并不区分这些集落中的单个细胞。因此,研究细胞命运决定的另一种选择是在分子和功能分析中,如单细胞测序或移植分析中,在单细胞水平上研究来自一个“母亲”HSC的“子”细胞。

然而,无论采用何种方法,首先,必须分离单个“子”细胞(这里也称为“双细胞分离”)。尤其是对于功能分析,以及对于表达研究,重要的是分离是在对细胞分子程序影响最小的条件下进行的。从骨髓或血样中分离hsc通常由FACS完成。但是,由于总细胞数较低(减少到2个子细胞),FACS不是双细胞分离的选项。在过去,双细胞分离是通过连续稀释实现的,这意味着将细胞从一个孔移到另一个孔,直到单独细胞出现。然而,这种方法不是很温和,造成细胞损伤甚至松动的风险很高。此外,两个细胞往往在一起减少了连续稀释的成功。

在这里,我们提出了一个更好的选择来温和地分离子细胞,从而实现每个单个细胞的可追踪性:使用CellCelector的交互捕获模式,可以拆分双细胞,同时通过细胞的实时图像来全面了解细胞的情况,忽略了丢失细胞的风险。此外,CellCelector的捕获方式对细胞非常温和,最大限度地减少了对细胞分子程序的影响。最后,捕获过程有严格的文件记录,允许完全的可追溯性。
Daughter cells originating from one HSC
Begin of doublet splitting
Target cell starts moving to the capillary
Target cell moved to the capillary
Gentle aspiration of the target cell
A: 起源于一个HSC的子细胞,红色箭头标记要分离的细胞。
B: 为了分开两个细胞,毛细管被放置在一个靠近细胞的位置,这个位置应该被挑选出来(红色箭头),并且离其他细胞最远。
C: 受毛细管吸力的吸引,细胞现在开始向毛细管的方向移动,靠近毛细管的细胞移动最快(红色箭头)。
D: 一旦细胞不能再逃逸,直到被吸引的细胞和其他子细胞之间的距离足够大,毛细管就会从其他细胞旁移开,能够安全地进行单细胞挑选(E)。
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