循环肿瘤细胞分离与分析

单细胞水平上CTC异质性的破译

循环肿瘤细胞（CTCs）是从肿瘤中脱落并进入血液循环的细胞。在第二部位的微环境适应和定殖后，它们形成转移，导致90%以上的肿瘤相关死亡。CTC是通过简单的抽血获得的，可以作为一种“液体活组织检查”来实时监测肿瘤特征，包括肿瘤间和肿瘤内的异质性。然而，由于大量白细胞和红细胞存在，其中CTC细胞数量较少，CTC的分离和随后的鉴定在技术上具有挑战性。目前已经开发了一系列检测、富集和分离CTC的分析方法。他们利用CTC特有的特性，如表面标志物或例如尺寸、密度或变形性等非标记方法。

ALS 已经开发出一种独特的、完整的检测和分离CTCs的解决方案。分离出的细胞可用于DNA、RNA或蛋白质组分析。这个解决方案是围绕着 ALS CellCelector™ 使用专门开发的耗材（如 MagnetPick™ 玻片）和经过验证的程序协议。

使用 ALS CellCelector™ 的单细胞CTC分离和分析工作流程

ALS CellCelector™ 用于典型的CTC 分离和分析工作流程图。*红细胞（RBC）裂解是可选的，取决于所使用的富集技术；**某些富集技术允许富集后的原位染色；在其他情况下，应在从富集设备中提取样品后进行染色。

与现有富集技术完全兼容

正如许多出版物已证实， ALS CellCelector™ 平台兼容多种上游富集技术：

阳性免疫磁珠富集法（基于EpCAM表面标志物等）： e.g. CellSearch^®, Isoflux™, MagSweeper™

基于CD45表面标志物的白细胞（WBC）阴性消除方式：e.g. Dynabeads™, RosetteSep™

基于微流体或过滤器的无标记分离： e.g. Parsortix™, Clearbridge™, Vortex™, ScreenCell™, RareCells™, Circulogix™ etc.

ALS 已经开发了工作流程和专用耗材，允许每个样本处理多达几十万个血细胞，而无需减少样本体积。

富集技术	参考文献
Positive immuno magnetic
CellSearch® (EpCAM)	Neumann et al., 2016
Isoflux™ (EpCAM)	Ma et al., 2016; Cabezas-Camarero et al., 2019; Nimir et al., 2019; Ding et al., 2019
MagSweeper™ (EpCAM)	Lohr et al., 2014
Dynabeads and hand-held magnet (rVAR2)	Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019
*CD45 negative depletion*
Dynabeads® CD45/Dynal® MPC®-S	Blassl et al., 2016
RosetteSep™ Human CD45	Yao et al., 2014
*Size-based separation*
Parsortix™	Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Donato et al., 2019
*Densitiy gradient centrifugation*
OncoQuick™	Heidary et al., 2014

ALS CellCelector™ 单细胞分离前使用的CTC富集技术和相应的发表论文（完整的文章参考可以在出版物页面上找到）。

从多种癌症样本中分离 CTC

ALS CellCelector™ 这项技术能够从任何癌症类型的液体活检中分离出纯单个肿瘤细胞。全世界领先的癌症中心使用 CellCelector™系统正在许多癌症实体和应用领域进行开发。完整的文章参考可以在出版物页面 Publications 找到。

Cancer type	References
Breast	Heidary et al., 2014; Schneck et al., 2015; Neumann et al., 2016; Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Sprouse et al., 2019
Prostate	Lohr et al., 2014; Ma et al., 2016; Nimir et al., 2019
Colorectal	Adalsteinsson et al., 2013; Cabezas-Camarero et al., 2019
Pancreatic	Kim et al., 2019
Ovarian	Blassl et al., 2016
Lung	Yao et al., 2014; Ding et al., 2019
Brain	Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019
Melanoma	Sprouse et al., 2019

CellCelector 科研平台在CTC分离应用中的优势

稳定可靠

极低的细胞损失（无死体积）
单细胞提取效率高达100%（取决于工作流程）
自动捕获控制（捕获/失败）

运行

在10分钟内捕获出20个单独的CTCs，CellCelector™ 与RNA分析和活细胞捕获完全兼容
CTCs的计数和分离全过程大约需要1小时/样本（从样本富集和染色开始）

简单易用

无需复杂样品制备
用户友好但功能强大的软件

多种功能

分离单个CTC和clusters
分离固定细胞及活细胞
直接兼容各种上游富集方法
基于细胞形态、病理染色和/或多达6个荧光标记的CTC自动识别
自动、半自动或手动捕获方式
捕获单个细胞或单次多个细胞
与大多数实验室器皿兼容：孔板、培养皿、显微镜载玻片、PCR板/管、定制耗材等。

完全兼容各种下游分析和培养工作流程

兼容多种单细胞分子分析方法，包括NGS、RNAseq等。
低量抽吸和分配样本，与所有单细胞WGA和qRT-PCR试剂盒无缝兼容
转移目标板区域具备温度控制（4至37°C），用于防止RNA降解或促进活细胞存活
低剪应力和快速细胞捕获，有利于活细胞繁殖

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