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CRISPR 单细胞克隆

CRISPR/Cas 基因编辑:CellCelector™ 可作为靶细胞分离和单细胞克隆的完美工具

CRISPR-Cas9基因编辑是一种基因改造细胞的方法。为此,细胞转染Cas9核酸酶,一种非特异性切割DNA的酶,以及一种引导Cas9核酸酶到达DNA指定位置的合成引导RNA,使该位置DNA被切断。由此产生的双链断裂激活了细胞内在修复系统。通过添加修复模板,同源定向修复(HDR)可以在修复过程中插入序列,从而导致敲入突变。在没有修复模板的情况下,通过非同源端接(NHEJ)实现修复。尽管如此,NHEJ通常会导致小的缺失或插入修复基因的序列中断,导致基因敲除突变。

然而,CRISPR-Cas9编辑的结果可能因细胞而异,从而导致细胞群体的异质性。然而,在许多实验环境中,有必要使细胞具备相同的遗传背景。这可以通过单细胞克隆使其携带期望基因来实现。

ALS CellCelector代表了此应用方向的完美科研平台。由ALS Automated Lab Solutions GmbH 和 Probiogen AG 共同开发的新的单细胞克隆方法HT-NIC与常用的已经商业化克隆方法(如有限稀释杂交瘤法,单细胞稀释步骤)相比带来很多优势,从而使细胞彼此完全分离以提供快速精准的单克隆性。然而,许多细胞可能无法忍受单细胞稀释,导致细胞大量丢失,因为细胞间缺乏通讯。使用我们的新方法可以解决这个问题,节省显著的成本和时间,并集成单克隆性和细胞活性证明功能,这大大增加了HT-NIC方法的吸引力。

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