细胞系开发

单细胞克隆用于药物细胞系开发的变革就在这里

你是否已经厌倦了在一大堆细胞培养板中播种数千个细胞，仅仅就是发现它们既不是单个细胞，也并非有活力，高产细胞？厌倦了仅仅为找到一个克隆，完成你的项目目标，筛选成百上千个细胞培养板？有什么可以给你带来在药物细胞系开发上新的机会？请使用 CellCelector™ 一台单细胞和克隆筛选的强大科研平台，现在您可以快速有效地评估和验证您的克隆，然后再决定选择哪一个。在仅仅几天的时间里，你将从单个细胞池中得到一大堆克隆体，这些克隆体已经被证明是单克隆的、有活力的和高产的。现在你可以使用实际数据可靠地预测克隆体的未来，而不是依靠大量的平板来筛出赢家。这节省了消耗成本，节省了培养箱空间，但最重要的是，通过避免失误、亚克隆和不必要的复杂程序来轻松实现你的项目目标。

已经融合单克隆性验证和活性检测的一轮单细胞克隆筛选工作流程

CellCelector™ 现在可以用于高通量单细胞克隆筛选，加速生成用于克隆药物生产的细胞系。克隆仅仅在一轮克隆培养中生成，同时工作流程中自动生成可靠的图像验证单克隆性证明（基于纳米孔列阵的高通量图像验证单克隆的HT-NIC方法）。

通过对克隆的单克隆性和生存能力的综合快速评估，以及克隆转移到96或384孔板后的行业领先增长率，CellCellector™ 单细胞克隆技术引领了下一代单细胞克隆新技术的发展方向。因此，它远远超出了有限稀释，FACS分类或单细胞打印技术等传统方法，并提供了一个优越选择。这种具有专利保护的新方法是与ProBioGen AG共同开发，并得到其他CellCellector™ 客户的一致好评。

CellCelector™ 纳米孔细胞培养板

HT-NIC方法基于CellCelector™ 纳米孔板（可从ALS获得）。这些培养板有24孔和6孔细胞培养板，每个孔底部有数千个微小的纳米孔。根据板的类型，这将导致每孔4300至22000纳米孔或每个板100000至130000纳米孔。纳米孔内的细胞可以有效地相互分离。由于它们被同一种培养基所覆盖，它们之间并没有相互隔离，这就导致了细胞的有效共培养。池中的所有细胞将有助于细胞系的生长，同时保持其单克隆性。这导致了行业领先的单细胞增长率，即使是极难生长的细胞系。

CellCelector™ 基于纳米孔板单细胞克隆筛选工作流程

细胞铺板方式与传统细胞培养板处理相似。之后这些细胞按照经典的泊松分布随机分布到每个纳米孔内。自动扫描种子孔，然后自动识别包含单个细胞的所有纳米孔，提供了一个可靠的基于图像的单克隆性证明。根据接种细胞的数量，每孔可捕获 400 至 600个单个细胞，并可进行分析。播种多个孔允许最多14000个纳米孔包含一个细胞-所有这些都在一个纳米孔板内实现。

Nanowell-based single cell cloning workflow

单克隆性被证明后，细胞将在培养箱中生长3至6天，每个克隆最多可生长20至75个细胞。与传统的基于甲基纤维素的方法相反，基于CellCelector™ 纳米孔的方法允许菌落在液体介质中生长。克隆体共享相同的介质，但通过纳米孔壁有效地将它们彼此隔开。当细胞生长为单细胞克隆后，再次扫描纳米孔板并自动选择单克隆活克隆并转移到96或384孔板中进行进一步分析和放大。

全自动单克隆性证明：纳米孔中的可靠的单细胞检测

Monoclonality assessment: single cell detection in nanowells

在传统的单细胞克隆工作流程中，单个细胞被铺到96孔板中，由于细胞通常位于孔的边缘，因此很难在明亮的区域进行可靠的自动单细胞检测。因此，通常在克隆生长后的第0天手动或追溯检查指定克隆的单克隆状态。但是为什么要在一个比单个细胞所占据的表面大100倍的孔内搜索一个细胞呢？用Cellcelector™ HT-NIC方法在200µm的纳米孔内细胞被分离并清晰可见，因此可以通过软件可靠地自动识别，甚至在刚刚铺板后或者接触到纳米孔的边缘时。

告别有限稀释，CellCelector™ 提供100%单克隆性

有限稀释法是一种著名的单细胞克隆的传统方法，它完全基于单克隆的统计概率，而单克隆概率取决于根据泊松分布每孔植入的细胞的平均数量。为了限制多克隆孔的百分比，通常每孔播种不超过0.2个细胞。不幸的是，只有16%的孔是单克隆的（也就是说，八分之七的平板是空的）。因此，要获得400个单细胞孔，需要播种25个96孔板。通过每孔接种0.5个细胞，可以使单细胞孔的数量加倍，但代价是非单克隆孔的数量显著增加。

通过设备自动识别单细胞纳米孔，跟踪其生长到克隆，并将生长的克隆无交叉污染转移到96孔板上Cellcelector™ HT-NIC克隆筛选法提供100%的单克隆孔，不依赖于样品制备方法、细胞类型或用于铺纳米孔板的细胞密度。

基于纳米孔的CellCelector™ 克隆筛选法获得单克隆孔的效率与两种铺板密度的有限稀释法的比较如图。用有限稀释法获得400个单克隆孔需要使用26块或13 块96孔板，0.2个细胞/孔或0.5个细胞/孔的铺板密度。要达到相同数量的单细胞纳米孔，只需CellCelector™的纳米孔板的一个大孔就足够了。

获得最高百分比的活单细胞克隆

对有限稀释法进行改进，使单个细胞培养出的活克隆仅占10%至20%，其他传统方法如FACS单细胞分选或单细胞打印铺板法可使单细胞在孔内接种率大大提高。高剪切应力通常与流式细胞术相关，并且转移的单个细胞单独存在于大量的培养基中，导致不确定的生长率在30%到64%之间。此外，这需要专门的和昂贵的带有外源生长因子的克隆培养基，并且不适合于难以生长的细胞系，因为这些细胞根本无法从单个细胞中生长。

然而在 CellCelector™ HT-NIC方法中，所有铺孔的细胞共享相同的培养基，其通过释放自然生长因子而不损害克隆性，促进彼此的生长。只有在一个克隆被证明是单克隆的并且是高活力的之后，它才会被选中并轻轻地转移到96孔板中。因为它现在已经是一个可存活的单克隆小克隆团，而不是一个被转移的孤单细胞，它将更容易在转移后的大孔里继续生长。

消除样品间交叉污染的一次性消耗品

ALS 提供价格实惠的一次性Cellcellector™ 玻璃毛细管和纳米孔板防止了克隆实验之间的交叉污染。一个玻璃毛细管和一个纳米孔板（甚至后者的几个孔）足以进行单细胞克隆实验，而不受克隆转移目的微孔板数量的限制。

根据预算情况，实验结束后，系统可选择自动清洗和消毒已使用过的毛细管，以备日后使用。

在可控无菌环境下收获可靠的单细胞克隆

在无菌条件下进行分析和克隆转移CellCelector™ 系统可被放置在生物安全柜内。它可以是一个标准的洁净柜或一个定制的外箱，由ALS与系统一起提供。为了进一步提高细胞活力和分析稳定性，CellCelector™ 也可安装在ALS细胞孵育箱Flowbox™ 中，它结合了一个紧凑的层流细胞培养罩，温度，湿度和二氧化碳控制，以及紫外线灯杀菌等功能。