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自动化高通量单B细胞分泌抗体筛选和回收

加速抗体发现:一天内完成分析和分离数千单个浆 B 细胞

精准识别和筛选分泌高水平所需抗体的最佳克隆是抗体发现过程中关键且耗时的步骤之一。

我们用于分析和分离单 B 细胞的新方法是将 CellCelector™ 与独特的 Nanowell 技术相结合,并将高通量细胞筛选、成像、灵敏的单细胞测定以及精准细胞分离结合到同一个分析平台。 单细胞分析允许检测具有独特特性的稀有抗体,这些特性在传统筛选方法下很难找到。 单个细胞可立即进行多种测试分析,而不是培养数周以达到测定的最小细胞数量。

CellCelector 一天完成 B 细胞筛选和分离工作流程

第 1 步:细胞上样易于操作

手动将单细胞悬液分配到纳米孔阵列芯片中。 纳米孔阵列中每个孔的特征在于其底部的附加孔图案。 根据板类型和纳米孔尺寸不同,每个大孔内可实现 60,000 到 200,000个规则的纳米孔。 添加单细胞溶液后,单个细胞按照泊松分布随机分布在纳米孔中。
Nanowellarray with seeded cells and beads
H 100 阵列芯片:底部设计为不同数量的六边形 100 µm 纳米孔,可用于 B 细胞和抗原特异性包被珠阳性细胞筛选

第 2 步:单细胞筛选

使用 ALS CellCelector 在明场中自动扫描细胞接种孔。 软件可自动识别单细胞纳米孔位置。
Identification of single cell wells

第 3 步:运行分泌抗体检测

在单个细胞的纳米孔中直接进行特定的细胞分泌检测,并快速识别阳性分泌细胞。

CellCelector B 细胞筛选工作流程支持多种类型的细胞分析,例如

基于微珠的抗原特异性测定

同时加入浆 B 细胞与抗原特异性包被的珠子混合液进行检测。

利用板内包埋抗原进行抗原特异性测定

在加入浆 B 细胞之前,纳米孔阵列的表面包有抗原并用 BSA 溶液封闭。
Antigen specific bead assay
Antigen specificity assay with plate capture coating

表达抗原报告细胞测定

浆 B 细胞与表达特定抗原的报告细胞同时加入检测。
Antigen-expressing reporter cell assay

其他可选检测方法:

  • 受体/配体阻断试验
  • 细胞表面标志物测定
  • 多重分泌试验
  • 功能测定(例如表达 GFP 的细胞)

第 4 步:细胞转移

在识别出所需细胞(命中)后,ALS CellCelector 将它们转移到适当的目标容器中以进行后续分析和处理。

ALS CellCelector 基于精准微量液体控制有利于非常轻柔的细胞捕获,保证了转移B 细胞的存活率。
CellCelector during picking of single cells

第 5 步:生成报告

从单细胞筛选到转移命中靶细胞的整个过程都有完整的记录并符合 GLP 和 GMP 标准。 每个捕获过程的高质量显微图像允许以后查验。 所有成像和数字数据(例如形态和光谱值)以及每个细胞的来源和目标位置都存储在数据库中,并且可以快速轻松地导出到客户的 LIMS 系统中。

CellCelector™ 单 B 细胞筛选流程的优势

稳定性

  • 无需融合步骤
  • 无 B 细胞损失
  • 一次性毛细管,回收之间没有交叉污染

灵敏度

  • 极其温和的细胞转移可确保在筛选和分离后B细胞的活性,满足下游应用要求

灵活性

  • CellCelector™ 平台适用于为特定项目量身定制的多功能分泌测定方法
  • 深度表征:亲和力、特异性和功能性



自动化

  • 实现从细胞上样后到输出阳性样本的全过程自动化,并具有整个筛选和细胞收集过程的完整文档


精确

  • 精确识别亚纳升体积纳米孔中的单个细胞
  • 高达 40 倍放大倍率的高质量图像


高通量

  • 基于 CellCelector™ Nanowell 筛选方法,可同时筛出数千个阳性单 B 细胞

效率

  • 筛选过程从几个月缩短到一天
  • 提高发现稀有抗体的成功率
  • 节省大量时间和成本;平价耗材

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