分离精子细胞
利用 ALS CellCelector™自动分离单个精子细胞
单精子细胞的分离对于基因指纹分析、家庭关系问题的澄清、法医学发现性犯罪以及体外受精过程都是非常重要的。
在这里我们具体描述了使用 ALS CellCelector™ 分离单个精子细胞。
高度精确的机器人技术与倒置显微镜技术的独特结合，使得利用玻璃毛细管自动检测和分离单个精子细胞成为可能。使用 CellCelector™ 系统的标准化程序可以代替耗时的手工操作。
用20x物镜在明亮的光照条件下观察和分离单个精子细胞。
精子细胞的尺寸大约5 x 33μm，是用显微镜下测量物体的一些特殊软件功能测定的。
为了获得更好的视图，矩形标记区域为放大显示（右下角）。
单精子细胞检测
单个精子细胞的检测可以在手动模式下通过鼠标点击实时图像屏幕来完成，也可以在样本扫描后自动使用一组调整后的检测参数（直径、面积、延伸率等）实现。
基本检测是通过定义一个灰度值范围来完成的。目标细胞可以从邻近细胞和背景中分离出来。
根据灰度阈值的设置，可以检测完整单个精子，也可以只检测精子细胞的头部。
建立自动检测单个人类精子细胞的参数。
不同的灰度值范围（A和B）允许基于参考图像（C）检测精子的不同部分（D和E，检测区域标记为绿色）。
考虑直径、面积、延伸率（F）等附加参数，可以进一步提高扫描结果（G & H）。
单精子细胞分离
用内径为30μm的硼硅酸盐玻璃毛细管分离单个精子细胞。通过使用体积为60nl的液体在细胞正上方形成抽吸压力，细胞从底部分离并用液体浸泡到玻璃毛细管中。将分离的精子细胞转移到2x9孔Ibidi载玻片的不同孔中。每一个单细胞的分离都是由捕获过程前后拍摄的图像自动记录下来的，并保存在数据库中。
在分离单个精子细胞之前（左）和之后（右）拍摄显微图像。
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