精确数量细胞的分离
为你的验证实验得到精确的细胞计数
在许多应用中，如测量富集率或评估灵敏度和特异性，需要精确数量的细胞以保证高质量插入作为参考样品。传统的细胞分选技术，如流式细胞仪或单细胞印刷技术，不能保证如此精确数量的细胞沉积到目的孔/管中。
ALS CellCelector™ 科研平台和我们的纳米孔板技术相结合，可以非常精确和温和地分离出精确数量的细胞。因此，例如，如果您的分析需要精确计数1、5、10、50或100个细胞，CellCelector将精确地检索出这些1、5、10、50或100个完整的细胞。
图1。 ALS CellCelector™ 支持分离转移细胞到任何标准或定制孔板、管或小瓶中
工作流程
图2。CellCelector ™ 自动分离精确数量细胞的工作流程。
我们的CellCelector™ 分离精确数量细胞的方法包括：（i）在 CellCelector™ S200 ULA纳米孔板中接种细胞，细胞密度与每个纳米孔的目标细胞数相对应；（ii）纳米孔中细胞的自动扫描和计数；（iii）自动选择填充有目标细胞数量的纳米孔；（iv）操作员确认备选孔列表；（v） 自动将选定的细胞组转移到目的管/孔内，并对整个过程进行完整跟踪（图2）。
细胞播种统计
当将单细胞悬浮液铺到纳米孔板中时，细胞被随机种到纳米孔内。理想情况下，单细胞悬浮液均匀播种会遵循标准泊松分布。在这里，随机播种到纳米孔中一定数量的细胞（k）的概率（p）由如下方程决定。
公式中，λ是每个纳米孔的平均种子细胞数。图3显示了几种细胞接种密度下S200 24孔纳米孔板一个孔中的理论和测量的细胞分布。这样就可以计算出需要植入24孔板的每个孔中的细胞数量，从而最大限度地提高在纳米孔内捕获所需数量细胞的概率。
图3。理论（线）和实验（点）泊松分布种子细胞密度1，5，10和20细胞/每纳米孔。扫描和分析的纳米孔总数为2500个。
自动扫描和细胞计数
图4。在FITC通道中扫描一个孔的概览图像。圆圈显示扫描和分析区域。
如果细胞被荧光标记（例如使用CellTracker™ 染料），则可以在BF和任何荧光通道（图3和图4）中扫描种子孔。细胞计数可以在BF和荧光模式下进行。细胞计数后，用户可以在纳米孔图像库中查看所有纳米孔的图像。
图5。200µm纳米孔中的典型细胞分布，每个纳米孔的平均细胞密度为20个染色的SK-BR-3细胞。左：明场，右：FITC。
图6。CellCellector™ 软件自动选择含有5个细胞的共12个纳米孔示例。
自动转移（捕获）
一旦操作员验证了要转移细胞的纳米孔列表，系统将自动从所有选定的纳米孔中进行挑选。在细胞捕获过程中，系统会自动保存捕获之前和之后的图像，以便进行质量控制。该系统还允许将多个纳米孔的内容物汇集到一个目的管中，从而形成大量细胞的沉积，例如20个细胞=2个纳米孔x 10个细胞，100个细胞=5个纳米孔x 20个细胞。
图7。选择一组20个细胞的示例。自动保存捕获前后的图像。
图8。在光学平底PCR管中检测20个细胞。
100%挑选出的细胞都放入目的孔中。如果细胞转移到一个平底板或管，细胞沉积后可以很容易地通过 CellCelector™ 观察和计数（图8）。
文档
图9。，与分离到目的96孔板特定孔内细胞相对应的细胞捕获前纳米孔图像库示例
用户可以导出所有数值数据，包括源板和目的板的完整追踪信息，以及与所选纳米孔相关的所有图像（扫描、捕获前后等）。
CellCelector™ 分离精确数量细胞工作流程的优点
性能
- 唯一能保证分离出最少单个细胞的精确数量细胞的系统。
- 可靠的基于图像的确认：没有漏掉的细胞。
- 100%的捕获效率：没有细胞落下或丢失。
- 对细胞非常温和。
灵活性
- 兼容任何尺寸和类型的细胞。
- 同时适用于固定的细胞和活细胞。
- 在明场和/或荧光条件下自动细胞计数。
- 灵活的分离方案：可使整个目的板上的孔内细胞数量相同，或创建不同数量的细胞分配方案，例如1、2、5、10、20个细胞/孔。
- 以固定比例混合几个细胞群。
易用性
- 样品制备简单。
- 软件界面友好。
- 无需日常维护。
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