CTCの分離と分析

シングル細胞レベルでのCTCの不均一性の解読

循環腫瘍細胞（CTC）は、腫瘍から脱落して血液循環に入った細胞です。二次部位の微小環境の適応とコロニー形成に続いて、それらは転移を形成し、これが腫瘍関連死の90％以上の原因となっています。単純な採血によって得られたCTCは、腫瘍間および腫瘍内の不均一性を含む腫瘍の特徴をリアルタイムで監視するための「リキッドバイオプシー」として機能します。ただし、CTCの分離とその後の特性評価は、豊富な白血球と赤血球の中でCTC細胞数が少ないため、技術的に困難です。CTCの検出、濃縮、分離のための幅広い分析メソッドが開発されています。それらは、表面マーカーの発現や、サイズ、密度、変形能などのCTC固有の特性を利用します。

ALSは、濃縮および染色ステップ後のCTCの検出および分離のための独自の完全なソリューションを開発しました。分離された細胞は、DNA、RNA、またはプロテオーム分析に使用できます。このソリューションは、ALSCellCelector™システムを中心として特別に開発された消耗品を（例えばCellCelectorナノウエルアレイ、MagnetPick™スライド）と検証済みのプロトコル利用しています。

ALSCellCelector™を使用したシングルセルCTCの分離および分析ワークフロー

ALSCellCelector™一般的なCTCの分離および分析ワークフロー内で使用されます。*赤血球（RBC）溶解はオプションであり、使用する濃縮技術によって異なります。**特定の濃縮技術により、濃縮後のinsitu染色が可能です。その他の場合、染色は濃縮装置からサンプルを取り出した後に行う必要があります。

既存の濃縮技術との完全な互換性

多くの出版物に示されているように、ALS CellCelector™プラットフォームは、さまざまなアップストリーム濃縮テクノロジーと互換性があります。

ポジティブ免疫磁気濃縮（EpCAMの表面マーカーなどに基づいて）

例：CellSearch^®、Isoflux™、MagSweeper™

CD45表面マーカーに基づく白血球（WBC）の負の枯渇

例：Dynabeads™、RosetteSep™

マイクロフルイディクスまたはフィルターに基づくラベルフリー分離

例：Parsortix™、Clearbridge™、Vortex™、ScreenCell™、RareCells™、Circulogix™ 等

ALSは、サンプル量を減らすことなく、サンプルあたり最大数十万個の血球を処理できるワークフローと消耗品を開発しました。

濃縮技術	参考文献
*免疫磁気ビーズ*
CellSearch® (EpCAM)	Neumann et al., 2016
Isoflux™ (EpCAM)	Ma et al., 2016; Cabezas-Camarero et al., 2019; Nimir et al., 2019; Ding et al., 2019
MagSweeper™ (EpCAM)	Lohr et al., 2014
Dynabeads and hand-held magnet (rVAR2)	Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019
*CD45ネガティブセレクション*
Dynabeads® CD45/Dynal® MPC®-S	Blassl et al., 2016
RosetteSep™ Human CD45	Yao et al., 2014
*サイズベース分離*
Parsortix™	Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Donato et al., 2019
*密度勾配遠心分離*
OncoQuick™	Heidary et al., 2014

CTC濃縮技術に使用されたALS CellCelector™シングルセルアイソレーションおよび関連する公開論文は「出版物」ページをご参照下さい。

さまざまな種類のがんからのCTCの分離

ALSCellCelector™テクノロジーは、あらゆる種類の癌のリキッドバイオプシーから純粋な単一腫瘍細胞を分離することができます。 CellCelector™システムを使用して世界中の主要がんセンター、多くのがんの実体と応用分野での開発に取り組んでいます。完全な記事は「出版物」のページをご参照下さい。

がんの種類	参考文献
Breast	Heidary et al., 2014; Schneck et al., 2015; Neumann et al., 2016; Lampignano et al., 2017; Szczerba et al., 2019; Gkountela et al., 2019; Reinhardt et al., 2019; Sprouse et al., 2019
Prostate	Lohr et al., 2014; Ma et al., 2016; Nimir et al., 2019
Colorectal	Adalsteinsson et al., 2013; Cabezas-Camarero et al., 2019
Pancreatic	Kim et al., 2019
Ovarian	Blassl et al., 2016
Lung	Yao et al., 2014; Ding et al., 2019
Brain	Agerbæk et al., 2018; Bang-Christensen et al., 2019
Melanoma	Sprouse et al., 2019

CTC分離のためのCellCelectorプラットフォームの利点

信頼性のある

セル損失が非常に低い（デッドボリュームなし）
最大100％の単一細胞ピッキング効率（ワークフローによる）
自動ピッキング制御（ピッキング/失敗）

速い

20個の個別の単一CTCsについて、CellCelector™はわずか10分で、RNA分析および生細胞ピッキングを相互的に行えます。
CTCsの分離と分離のプロセスは、サンプルごとに約1時間で行えます（濃縮および染色されたサンプルから開始）

使いやすい

複雑なサンプル準備は不要
ユーザーフレンドリーでありながら強力なソフトウェア

汎用性が高い

個々の単一CTCsおよびクラスターの分離
固定細胞と生細胞の分離
さまざまなアップストリーム濃縮方法との直接互換性
細胞形態、病理学的染色に基づく又は、最大6つの蛍光ラベルによるCTC自動検出
自動、半自動、または手動のセル選択とピッキング
個々のセルまたはセルプールからのピッキングを選択
ほとんどのラボウェアと互換性：ウェルプレート、ペトリデッシュ、顕微鏡スライド、PCRプレート/チューブ、ナノウェルアレイ、カスタム消耗品、他メーカーのオープンスタンス容器など。

さまざまなダウンストリーム解析および培養ワークフローと完全な互換性

DNA次世代シーケンサー、RNAシーケンサーなどを含む幅広いシングル細胞分子分析法との互換性
すべてのシングルセルWGAおよびqRT-PCRキットとのシームレスな互換性のための低吸引量および分注量
RNAの分解を防ぎ、生細胞の生存を促進するための温度制御（4〜37°C）されたデッキトレイ（分配側）
生細胞の増殖を可能にする低せん断応力と高速ピッキング

他に知りたいことはありますか？