半固形培地からのハイブリドーマおよびCHOクローンの選択
抗体産生のための高発現クローンのスクリーニングと単離
抗体産生のための新しい細胞株の開発における基本的なステップは、高レベルで一貫したレベルの標的タンパク質を産生するシングル細胞由来のクローンの同定です。従来の技術の時間と労働集約的なステップと比較して、CellCelector™による生産性スクリーニングはより効率的な方法で実行できます。
高生産性クローンの選択と分離
ハイブリドーマクローンの抗体生成は、クローン間で劇的に異なる可能性があります。クローンによって産生され、培地に分泌されるタンパク質は、蛍光標識された二次抗体によって可視化することができます。半固体培地の粘度により、抗体が培地にさらに拡散するのを防ぐため、シグナルは、それを生成した細胞クローンの周りに蛍光ハローとして現れます。特に高生産性のクローンを選択するには、CellCelector™ ソフトウェアは、明視野で見える細胞コロニーのサイズを細胞コロニーを取り巻く蛍光ハローのサイズと比較し、各クローンの抗体生産性の割合を計算します。これにより、複数のソースプレート間で細胞クローンをランク付けして、最良の抗体産生を実現できます。
ハイブリドーマクローン（水色）の概略図および蛍光色素標識二次抗体（黄色の円で緑色）による分泌抗体（濃い青色）の検出（A-C）
蛍光色素標識二次抗体（DF）とのインキュベーション後のハイブリドーマクローンの顕微鏡像（明視野と蛍光照明のオーバーレイ）。
抗体産生の強度は、コロニー周辺の蛍光ハローの直径と相関します。コロニーは抗体を産生せず（AおよびD）、コロニーは中量の抗体を産生します（BおよびE）。大量の抗体を産生するコロニー=高産生（CおよびF）。コロニーのサイズは似ています（明視野観察DFの拡大領域を参照）。
CHO細胞コロニーを産生する抗体; ALSCellCelector™ のセミソリッドメディアモジュールを使用したピッキング前後のQC画像
半固形培地モジュールで採取したCHO細胞コロニーを96ウェル分配プレートで培養した（採取後1日目と5日目）
CellCelector™メチルセルロースおよびその他の半固体培地からのモノクローナルコロニーピッキングの利点
高解像度光学系とインテリジェントイメージングシステム
- より大きなクローンの近くの小さなコロニーまたはシングル細胞の検出は、標的クローンのモノクローナル単離を確実にします。
- コロニーの構造を分析し、形態学的パラメーター（球形度や形状など）を定義して、疑わしい（細長い）コロニーをピッキングから除外することができます。
- 品質管理のための顕微鏡画像およびピッキング中のライブ画像（ピッキング前後の画像）
カスタマイズと柔軟性
- 最大6つの蛍光チャネル。フィルタセットは顧客のアプリケーション要件に基づいてカスタマイズできます。
- 標準およびカスタマイズされた分取および分配プレートタイプを使用できます。
- アップストリームとダウンストリームの自動化統合が可能です。
- 長期実験を可能にしたインキュベーターFlowBox
使い捨てチップの使用
- 自動交換プラスチックチップを使用することで、クロスコンタミネーションやノズルの目詰まりを回避
- チップの除染に洗浄ステップは不要
- さまざまなクローンサイズに利用可能な異なる径のキャピラリー
特徴
- プレートバッチからトップランクのクローンを選択：最初にすべてのプレートをスキャンし、次にプレートごとにピッキングします。
- 制御された低い吸引量と速度は、隣接するクローンの同時ピッキングを防ぎます。
- ピッキング中の隣接するクローンの動きの自動検証により、吸引前にすべてのターゲットクローンが自動的に再センタリングされます。
- ピッキング直前のターゲットクローンの周囲の領域の自動分析により、隣接するクローンに近すぎるクローンのピッキングが回避されます。
- クローンの品質、サイズ、生産性のランク付けなど、ユーザーが定義可能な並べ替えとランク付けの戦略が実行できます。
関連する出版物
- Zoldan, K. et al. Automated clonal selection of high-producing hybridoma colonies from methylcellulose-based, semi-solid medium using the cell separation robot CellCelectorTM nature methods application notes (2010)
- Caron A.W. et al. Fluorescent labeling in semi-solid medium for selection of mammalian cells secreting high-levels of recombinant proteins (CHO) BMC Biotechnol. 9: 42 (2009)
- Julien, A. et al. Antigen specific antibody-producing clones selected by isotypes Biosystems International Application Note
- Gilbert, R. Fluorescent labeling in Semi-Solid Medium to Identify High Expressing Clones for Recombinant Protein Production (CHO) CHI's Bioprocessing Summit Presentation, Boston 2011
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