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HSC娘細胞分裂

HSC娘細胞の分離または「ダブレット分裂」

造血幹細胞(HSC)は、機能する血液システムの確立と維持を担当する造血階層の最上位に位置します。HSCは、自己再生するだけでなく、造血血液系の複数の系統を生み出すことができることによってこれを達成します。それにより、自己複製と分化のバランスは、私たちの血液システムの健康的な機能にとって非常に重要です。

ただし、いずれかの幹細胞の運命につながるダイナミクスは完全に理解されていません。運命の意思決定を研究する1つの可能性は、CFCアッセイです(造血幹細胞コロニーを参照)。ただし、CFCアッセイは、シングルの幹細胞または前駆細胞からのコロニー形成を研究しますが、これらのコロニー内の単一細胞を区別しません。したがって、細胞運命決定を研究するための別のオプションは、単一細胞配列決定または移植アッセイなどの分子および機能アッセイにおいて、シングル細胞レベルで1つの「母」HSCに由来する「娘」細胞を研究することです。

ただし、どの方法を適用する場合でも、最初に、シングル「娘」細胞を分離する必要があります(ここでは「ダブレット分割」とも呼ばれます)。特に機能アッセイの場合だけでなく、発現研究の場合も、細胞の分子プログラムに最小限の影響を与える条件下で単離を行うことが重要です。骨髄または血液サンプルからのHSCの分離は、通常FACSによって実行されます。ただし、全体的なセル数が少ないため(2つのドーターセルまで)、これはダブレット分割のオプションではありません。過去には、ダブレット分割は段階希釈によって実現されていました。つまり、細胞が特異化されるまで、細胞をあるウェルから別のウェルにピペッティングしていました。ただし、この方法はあまり穏やかではなく、細胞に損傷を与えたり、細胞を失ったりするリスクが高くなります。さらに、ダブレットは一緒に座る傾向があり、段階希釈の成功率が低下します。

ここでは、各シングル細胞のトレーサビリティを可能にする娘細胞の穏やかな分離のためのより良いオプションを提示します:CellCelectorのインタラクティブピッキングモードで、ダブレットを分割することができますが、無視している細胞に何が起こっているのかをライブ画像で完全に概観します細胞を失うリスク。さらに、CellCelectorによるピッキングは細胞に非常に優しく、細胞の分子プログラムへの影響を最小限に抑えます。最後に、ピッキングプロセスは厳密に文書化されており、完全なトレーサビリティが可能です。
Daughter cells originating from one HSC
Begin of doublet splitting
Target cell starts moving to the capillary
Target cell moved to the capillary
Gentle aspiration of the target cell
A:1つのHSCに由来する娘細胞。赤い矢印は分離する細胞を示します。
B:ダブレットを分割するには、キャピラリーをセルの隣の位置に配置します。セルの隣の位置(赤い矢印)で他のセルから最も離れています。
C:毛細管力に引き付けられて、細胞は毛細血管の方向に動き始め、毛細血管に最も近い位置にある細胞が最も速く動きます(赤い矢印)。
D:細胞がそれ以上逃げることができなくなるとすぐに、引き付けられた細胞と他の娘細胞との間の距離が安全なシングル細胞の摘み取りを可能にするのに十分大きくなるまで、毛細血管は他の細胞から離れて移動します(E)。
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