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CRISPRシングルセルクローニング

CRISPR / Casによる遺伝子編集:CellCelector™ターゲット細胞の分離と単一細胞のクローニングに最適なツールとして

CRISPR-Cas9ゲノム編集は、細胞を遺伝子組み換えする方法です。その目的のために、細胞は、Cas9ヌクレアーゼ、非特異的にDNAを切断する酵素、およびCas9ヌクレアーゼを切断されるDNA位置に導く合成ガイドRNAでトランスフェクトされます。結果として生じる二本鎖切断は、細胞固有の修復システムを活性化します。修復テンプレートを追加することにより、相同性指向修復(HDR)は修復中に配列を挿入し、ノックイン変異を生じさせることができます。修復テンプレートがない場合、修復は非相同末端結合(NHEJ)によって実現されます。しかし、NHEJはしばしば、修復された遺伝子の配列を中断する小さな欠失または挿入を引き起こし、ノックアウト変異をもたらします。

ただし、CRISPR-Cas9編集の結果は細胞間で異なる可能性があり、その結果、細胞集団が不均一になります。ただし、多くの実験環境では、細胞の遺伝的背景が均一である必要があります。これは、希望する遺伝子型を持つ細胞の単一細胞クローニングによって達成できます。

ALS CellCelector ALS Automated Lab SolutionsGmbHとProbiogenAGによって開発された新しい単一細胞クローニング法HT-NICは、単一細胞希釈ステップを含む限界希釈クローニングなどの一般的に使用されるクローニング法と比較して、いくつかの利点を提供します。 単クローン性を提供するために互いに分離されています。 ただし、多くの細胞は、単一細胞の希釈を許容しない可能性があり、細胞間コミュニケーションが欠如しているため、細胞の損失が大きくなります。 私たちの新しい方法で、この問題は解決できました。 大幅なコストと時間の節約、および統合された単クローン性と実行可能性の証明により、HT-NICメソッドの魅力が増します。
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